Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1同型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现人体内自身HIV到经常出现1改进型肾病外科呕吐的的发展亲率在婴幼儿时期就有很好的揭示，多个人体内自身HIV阴性的婴幼儿当中亦有70%在血清转换成后10年末患上肾病，而随访15年的婴幼儿这一比重上升到84%。相对较，占外科1改进型肾病一半以上的改进型1改进型肾病的患病机制还没有受益充分的深入研究。

愈来愈多的人开始用作分阶段系统来假设1改进型肾病的的发展：群体在经常出现多种人体内自身HIV时带入第1之前，经常出现浓度出现异常时带入第2之前，经常出现呕吐时带入第3之前。一些多发人体内自身HIV阴性的群体，在1期和2期，的发展较慢，并发展为患病的1改进型肾病。我们之前揭示了一四组在首次安全检查到多种人体内自身HIV取样后仅仅10年无肾病的极快的发展者，这四组病患000人少，但形态十分明确。随后，我们见到人体内自身上皮细胞膜特异性CD8+T细胞膜质子化在的发展快速的病患当中也就是说不普遍存在，但在全面性患病和近十年普遍存在的肾病病患当中很容易安全检查到。这显然指出，与的发展病患相对，这些病患自身免疫质子化的恒定增强。

早期深入研究指出，尽管恒定性T细胞膜(Treg)数量正常人，但肾病病患普遍存在一些功能性缺陷，其当中除此以外对IL-2的质子化并能降低。此外，肾病病患当中的不稳定性CD4+T细胞膜显然对恒定更具抵抗性，表现为不稳定性T细胞膜的可抑制移向，自然转化成的Treg和体外转化成的其会Treg，以及上皮细胞膜随之而来的CD4+T细胞膜当中IL-2质子化移向。本深入研究的借此是揭示了CD4+恒定性T细胞膜(Treg)在一小群极快速的发展者当中的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法有：BOX深入研究是一项以群体系统化的纵向深入研究，在21岁以下确诊的病患血亲当中安全检查1改进型肾病的危险因素。我们之前揭示了近十年快速的发展者的形态，他们保持一致多重人体内自身HIV阴性超过10年，但没有经常出现肾病的外科呕吐，慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续保持一致无肾病并愿意获取大量血液取样的快速的发展者纳入T和B细胞膜功能性归纳。在目前的深入研究当中，8名慢的发展者(SP四组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身HIV阴性。所有的举例来说都保持一致稳定1改进型肾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身HIV对某些上皮细胞膜的阴性质子化，然而，一名病患早已保持一致稳定2期仅仅6年，但没有经常出现外科呕吐，一名病患被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集试验中取样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳当中对该ADP进行时了单独核能查。受控外周血单个核能细胞膜(PBMCs)，采用多数值流式细胞膜妖术和T细胞膜可抑制试验中核能查ADP当中Treg的高频亲率、表改进型和功能性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)进行时无指导聚类归纳，核能查Treg表改进型。

结果：与肥胖ADP相对，来自慢的发展体的梦境CD4+T细胞膜的指导聚类看出，激活命的梦境CD4+ Treg高频亲率上升，与糖皮质激素其会的TNFR相关细胞(GITR)特别强调上升有关。一名HbA1c消退的病患与的发展快速者和匹配的相比较四组相对，Treg著者有所不同。功能性归纳指出，与肥胖ADP相对，来自快速的发展体的Treg内皮细胞的CD4+不稳定性T细胞膜可抑制明显受损。表现为对不稳定性CD4+T细胞膜CD25和CD134特别强调的可抑制上升。

所示1 深入的表改进型归纳看出，CD4+Treg亚改进型在慢的发展队列当中上升。由FlowSOM作用于的Treg过道，聚集在来自所有ADP的活命CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标识物特别强调认定出10个元簇:梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用作9个不同Treg标识作用于的10个元簇的MST。每个链表象征性一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在链表四组一处上色。每个链表当中的饼所示问到单个标识的特别强调高级别。(b)每个元聚类的热所示，以看出整体标识特别强调。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于所示，以及FlowSOM定位的每个元簇的沙质。(e-l)相对于轻元素为每个metacluster罐两条路线所示(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞膜(l)。浅金色左上角象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核能查。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模改进型指出，Treg高频亲率的上升是的发展快速的标志。这两项依赖型(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的象征性性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR特别强调进行时受控，各种类改进型FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)四组以及ADPSP 606(浅金色)当中CD25+ cd127的高频亲率核能心内容所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型可数的罐两条路线所示;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3特别强调强度着色，标记突出的簇被定位为SP和HD队列之间的不同。(j)罐两条路线所示看出了在SP(黑纹)和HD(灰点)四组当中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于轻元素(比重)。(k)直方所示看出每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标识相对于特别强调与或多或少特别强调(金色);上列，缓存Treg_3;下面悄悄，缓存Treg_4。或多或少与所有其他簇当中标识的特别强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核能查

所示3 与肥胖献血者相对，的发展快速者梦境treg的GITR上升。每个梦境CD4+T细胞膜元簇(梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)安全检查每个特别强调标识的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的特别强调热所示(sp606不除此以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅金色)的FlowSOM GITR特别强调串联，看出直方所示(c)和核能心内容所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和核能查，p< 0.07(浅金色)所有ADP除此以外，p< 0.05(金色)ADPSP 606和匹配的HD不除此以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR特别强调，从这两项依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(浅金色)串联，看出直方所示(e)和核能心内容所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核能查

所示4 来自快速的发展的CD4+ treg细胞膜依靠不稳定性CD4+T细胞膜的并能降低。SP四组用金色的两条路线和左上角问到，HD四组用黄色的两条路线和左上角问到，浅金色的两条路线/左上角问到ADPsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被标识为CFSE, Treg按推论的比重滴定。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，培养3紧接著进行时流式细胞膜妖术安全检查。(a-d)与CD4+转发者相对于理应的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE可抑制比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比例。用作阴性相比较(激活命的响理应细胞膜则有treg)测算可抑制比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 不稳定性CD4+T细胞膜对快速的发展的T细胞膜活命化的可抑制更尖锐。SP四组用金色的两条路线和左上角问到，HD四组用黄色的两条路线和左上角问到，浅金色的两条路线/左上角问到ADPsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标识，treg按推论的比重滴定。用抗CD3 /28微珠活命化细胞膜，培养3紧接著进行时流式细胞膜妖术(CD25反染)和细胞膜因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培养。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE可抑制%-(b)。(c,d) CD25可抑制%-(c)和CD134可抑制%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大当中的特别强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得出的论点是，来自快速的发展子的活命化梦境CD4+Treg在GITR特别强调当中受益了引入和丰富，特别强调了促使深入研究Treg在1改进型肾病风险群体当中的一般而言的合理性。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28